第135章 黎明前的测序（5 / 8）
12000转，10分钟。
再次取出时，管底出现了一点点半透明胶状沉淀。
“rna沉淀出来了。”程溪瑶隔著护目镜，眼睛亮了起来。
江河：“弃上清，加1毫升75%的冰乙醇洗涤沉淀。”
轻轻悬浮沉淀后，第三次离心。
7500转，5分钟。
最后，用移液枪极其小心地吸走所有的乙醇液体，將离心管敞口放置在超净台的通风处。
“风乾5分钟，不能干透，否则很难溶解。”
五分钟后，江河加入20微升rnase-free的水，轻轻吹打。
“去测浓度。”江河把样本递给陆晓林。
陆晓林拿著样本走到nanodrop分光光度计前，取了一微升滴在检测基座上，放下悬臂。
电脑屏幕上立刻跳出一条曲线。
“浓度120 ng\/μl，a260\/280比值2.02。”陆晓林声音迅速，“师弟，提取极其完美！纯度极高，没有蛋白和苯酚污染！”
陈浩几个人长长地鬆了一口气，互相对视了一眼。
做到了！
江河毫不犹豫，道：“立刻进行逆转录，rna极易降解，必须马上把它变成稳定的a。”
“引物用什么？”陆晓林问。
“用隨机六聚体引物（random hexamers）做全转录本的逆转录。”
江河走到冰箱前，拿出逆转录试剂盒：“不需要特异性引物，我们在pcr阶段再用甲流通用的ha（血凝素）和na（神经氨酸酶）保守区引物去钓出目標片段。”
看著手里的试剂，江河眼神微动。
其实，如果这真的是一种完全未知的全新病毒，今晚的这几个小时根本连门槛都摸不到。
光是引物设计就能卡死全中国最顶尖的实验室两周时间。
但他不一样。
他记得h1n1的基因图谱，也知道它的外膜蛋白弱点，包括它最容易被哪种引物扩增。
基本就等同於，拿著標准答案，反向推导解题步骤。
所以效率才能这么高。
逆转录反应体系配製完毕。
放入pcr仪。
42c孵育60分钟，70c加热5分钟灭活逆转录酶。
凌晨5:30。 ↑返回顶部↑
再次取出时，管底出现了一点点半透明胶状沉淀。
“rna沉淀出来了。”程溪瑶隔著护目镜，眼睛亮了起来。
江河：“弃上清，加1毫升75%的冰乙醇洗涤沉淀。”
轻轻悬浮沉淀后，第三次离心。
7500转，5分钟。
最后，用移液枪极其小心地吸走所有的乙醇液体，將离心管敞口放置在超净台的通风处。
“风乾5分钟，不能干透，否则很难溶解。”
五分钟后，江河加入20微升rnase-free的水，轻轻吹打。
“去测浓度。”江河把样本递给陆晓林。
陆晓林拿著样本走到nanodrop分光光度计前，取了一微升滴在检测基座上，放下悬臂。
电脑屏幕上立刻跳出一条曲线。
“浓度120 ng\/μl，a260\/280比值2.02。”陆晓林声音迅速，“师弟，提取极其完美！纯度极高，没有蛋白和苯酚污染！”
陈浩几个人长长地鬆了一口气，互相对视了一眼。
做到了！
江河毫不犹豫，道：“立刻进行逆转录，rna极易降解，必须马上把它变成稳定的a。”
“引物用什么？”陆晓林问。
“用隨机六聚体引物（random hexamers）做全转录本的逆转录。”
江河走到冰箱前，拿出逆转录试剂盒：“不需要特异性引物，我们在pcr阶段再用甲流通用的ha（血凝素）和na（神经氨酸酶）保守区引物去钓出目標片段。”
看著手里的试剂，江河眼神微动。
其实，如果这真的是一种完全未知的全新病毒，今晚的这几个小时根本连门槛都摸不到。
光是引物设计就能卡死全中国最顶尖的实验室两周时间。
但他不一样。
他记得h1n1的基因图谱，也知道它的外膜蛋白弱点，包括它最容易被哪种引物扩增。
基本就等同於，拿著標准答案，反向推导解题步骤。
所以效率才能这么高。
逆转录反应体系配製完毕。
放入pcr仪。
42c孵育60分钟，70c加热5分钟灭活逆转录酶。
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