第204章 孙教授：打不过能加入吗？（5 / 6）
孙长明坐直了身体，开始长篇大论：“最重要的就是放弃传统的trizol，我们採用了硅胶膜离心柱法结合多重酶解，首先，在裂解阶段加入高浓度的蛋白酶k，56度水浴消化一个小时，然后，利用离心柱进行过柱，为了洗掉多糖杂质，我们专门配製了一种含高浓度盐酸胍和异丙醇的洗脱液，反覆洗脱三次。”
“虽然这个流程耗时要四个多小时，成本也高，但纯度那是没得说，a260/280的比值，我们稳定做到了1.75以上！这在当前的液体活检领域，绝对是领先水平！”
说完，孙长明往椅背上一靠，端起桌上的水杯喝了一口，等待著惊嘆声。
1.75的纯度，在08年，確实值得骄傲。
然而，实验室里眾人的表情都怪怪的。
大家面面相覷，好像不知道该说什么好。
孙长明皱了皱眉：“怎么？没听懂？也是，这套酶解过柱的体系確实复杂了点，你们刚接触湿实验，慢慢来————”
“不是，孙教授。”陈浩默默地举起了手，“我有个问题。”
“你说。”孙长明点点头。
陈浩语气真诚地发问：“既然是要解决蛋白污染和降解的问题，为什么一定要用蛋白酶k去水浴消化一个小时，还要花那么高成本去买离心柱反覆洗脱呢？”
孙长明愣了一下：“不用这些，你怎么去蛋白？怎么提纯？”
陈浩理所当然地回答：“双重氯仿抽提，加糖原共沉淀啊，我们老大提出来的这个方法，牺牲点第一次的上清液体积，再加一次氯仿离心，蛋白就全沉下去了，然后补5微升糖原把rna析出来，整个流程下来四十分钟就搞定了，效果很好呀，为什么要搞得像你那么复杂？”
孙长明：“？”
反应了半天后，孙长明抗拒道：“不对，氯仿確实能去蛋白，但你抽提两次，水相里的rna早就流失得七七八八了，就算加了糖原，浓度也绝对达不到下游要求，纯度就更別提了，能过1.5都算你们运气好。”
“可是————”蔡卓群在旁边忍不住插嘴。
“没什么可是的，科研需要的是严谨，你们用这种糙办法，跑出来的数据全都是假阳性或者直接假阴性。”
就在这时，很巧嗷。
离心机跑的新一批內容出来了。
陈浩道：“孙教授，数据是不是真的，测一下就知道了。”
蔡卓群立刻上前，打开离心机盖，加入无酶水，溶解。
nanodrop分光光度计前。
1微升的样本滴入基座。
测量！
屏幕刷新，一排数据跳了出来。
浓度：14.5ng/ul。
a260/280：1.95。
a260/230：2.03。
孙长明：“啊？”
1.8到2.0是rna纯度的完美区间。
他引以为傲、耗时四小时、加了各种昂贵试剂才跑出的1.75。 ↑返回顶部↑
“虽然这个流程耗时要四个多小时，成本也高，但纯度那是没得说，a260/280的比值，我们稳定做到了1.75以上！这在当前的液体活检领域，绝对是领先水平！”
说完，孙长明往椅背上一靠，端起桌上的水杯喝了一口，等待著惊嘆声。
1.75的纯度，在08年，確实值得骄傲。
然而，实验室里眾人的表情都怪怪的。
大家面面相覷，好像不知道该说什么好。
孙长明皱了皱眉：“怎么？没听懂？也是，这套酶解过柱的体系確实复杂了点，你们刚接触湿实验，慢慢来————”
“不是，孙教授。”陈浩默默地举起了手，“我有个问题。”
“你说。”孙长明点点头。
陈浩语气真诚地发问：“既然是要解决蛋白污染和降解的问题，为什么一定要用蛋白酶k去水浴消化一个小时，还要花那么高成本去买离心柱反覆洗脱呢？”
孙长明愣了一下：“不用这些，你怎么去蛋白？怎么提纯？”
陈浩理所当然地回答：“双重氯仿抽提，加糖原共沉淀啊，我们老大提出来的这个方法，牺牲点第一次的上清液体积，再加一次氯仿离心，蛋白就全沉下去了，然后补5微升糖原把rna析出来，整个流程下来四十分钟就搞定了，效果很好呀，为什么要搞得像你那么复杂？”
孙长明：“？”
反应了半天后，孙长明抗拒道：“不对，氯仿確实能去蛋白，但你抽提两次，水相里的rna早就流失得七七八八了，就算加了糖原，浓度也绝对达不到下游要求，纯度就更別提了，能过1.5都算你们运气好。”
“可是————”蔡卓群在旁边忍不住插嘴。
“没什么可是的，科研需要的是严谨，你们用这种糙办法，跑出来的数据全都是假阳性或者直接假阴性。”
就在这时，很巧嗷。
离心机跑的新一批內容出来了。
陈浩道：“孙教授，数据是不是真的，测一下就知道了。”
蔡卓群立刻上前，打开离心机盖，加入无酶水，溶解。
nanodrop分光光度计前。
1微升的样本滴入基座。
测量！
屏幕刷新，一排数据跳了出来。
浓度：14.5ng/ul。
a260/280：1.95。
a260/230：2.03。
孙长明：“啊？”
1.8到2.0是rna纯度的完美区间。
他引以为傲、耗时四小时、加了各种昂贵试剂才跑出的1.75。 ↑返回顶部↑